ויטמין A בדם

ערכי הייחוס (הנורמה) של ריכוז הוויטמין A (רטינול) בסרום הדם: אצל ילדים 1-6 שנים - 0.7-1.5 μmol / l, 7-12 שנים - 0.91-1.71 μmol / l, 13 -19 שנים - 0,91-2,51 μmol / l; במבוגרים זה 1.05-2.09 μmol / l.

ויטמין A מתייחסת liposoluble ו קיים בשתי צורות - ויטמין A בפועל או רטינול (נמצא רק במוצרים מן החי) ו- A פרו-ויטמין, המכונה קרוטן (שהוכן החי או מן הצומח), אשר ניתנות להמרה רטינול בקירות דרכי העיכול. כ 50-90% של רטינול נלקח עם מזון נספג במעי הדק מועבר במתחם קשורה אל chylomicrons אל הכבד, שם הוא מאוחסן בצורה של רמינול palmitate. במידת הצורך, הוא משוחרר לתוך זרם הדם בצורה של רטינול, אשר בשילוב עם ויטמין A מחייב חלבון. בסרום, ויטמין A מחייב חלבון + מתחם רטינול נקשר transthyretin. מסרום, רטינול נתפס על ידי תאים היעד, כגון photoreceptors הרשתית ואפיתל.

כאשר ויטמין A נכנס הגוף עולה על הדרישות (180-430 מיקרוגרם של רטינול ליום בהתאם לגיל, מין ומצב פיזיולוגי), עודף שלה מופקד בכבד להרכיב את המחסן של ויטמין זה. עם צריכת מופחתת של רטינול מן המזון, חנויות הכבד שלה משוחררים לתוך זרם הדם, שמירה על ריכוז רטינול בסרום ברמה נורמלית (מעל 0.7 μmol / L). צורות פעילות ביולוגית אחרות של ויטמין A (רטינלית וחומצה רטינואית) נמצאות בדם בריכוז נמוך מאוד (מתחת ל -0.35 μmol / L); על אסטרים של חשבונות רטינול עבור כ 5% מכלל ויטמין A (0.1-0.1 μmol / l).

ויטמין A יש תפקיד חשוב בתהליכי הפחתת חמצון. רטינול מקדם את היווצרות הגליקוגן בכבד ובשרירים, מקדם את עליית הכולסטרול בדם, לוקח חלק בסינתזה של הורמונים סטרואידים והורמוני מין. היא נדרשת צמיחת היווצרות resynthesis שלד עצמות של לרודופסין, וגם תורמת לתפקוד התקין של הקרומים הריריים האפיתל של כיסוי העור, מניעת מטפלזיה שלה, hyperkeratosis והשלה מוגזמת. ויטמין A מסייע לחיזוק השיער, השיניים והחניכיים. בשנים האחרונות, זה מראה תפקיד מגוון של ויטמין A למניעת הסרטן לבין התקנה חסינה (החיונית להשלמת phagocytosis, להגדיל את הסינתזה של איג, ממריץ את ייצור תאי T קטלני, ממגר את הסוג T-helper השנייה et al.). ויטמין A - נוגד חמצון פעיל, הפועל בעיקר בנוכחות ויטמין E; זה מגן על ויטמין C מפני חמצון. מחסור בוויטמין A נחשב כגורם סיכון לממאירות ממאירות. במחקרים ניסויים זה הראה כי עלייה בתכולת ויטמין A בתזונה מגדילה את משך החיים החציוני של 17.5%. אבץ הוא cofactor חיוני של ויטמין A מטבוליזם (הכרחי לסינתזה של ויטמין A מחייב חלבון).

הדרישה היומית הממוצעת עבור רטינול למבוגרים (20-50 שנים) היא 1.2 מ"ג (4000 IU, 1 IU שווה ל- 0.3 מיקרוגרם רטינול), לנשים בהריון - 1.5 מ"ג (5000 IU), להנקה - 8 מ"ג (6000 IU), עבור אנשים מעל 60 שנים - 2.5 מ"ג (10,000 IU). לפחות שליש הדרישה היומית של רטינול צריכה להימסר לגוף בצורה מוכנה; את השאר ניתן לספוג על ידי שימוש של קרוטנואידים, אשר צורות retinol בגוף. יש לזכור כי כ -30% של רטינול במזון נחרב על ידי טיפול בחום שלהם. הפעילות של רטינול גבוהה פי 2 מאשר קרוטן, בנוסף, זה רק 30-40% נספג לתוך המעי. לכן, בהערכת צריכת התזונה, זה נחשב כי 1 מ"ג של רטינול בערך מתאים 6 מ"ג של קרוטנואידים.

קביעת רטינול (ויטמין A) וקרוטנואידים בסרום על פי בסיי בשינוי LA Anisimova

עקרון השיטה

קביעת ויטמין A ו carotenoids מבוסס על הידרוליזה שלהם פתרון אלכוהול אלקליין, ואחריו מיצוי עם תערובת של ממיסים אורגניים.

ריאגנטים

• 11 M פתרון של הידרוקסיד אשלגן (KOH).
• 96% אלכוהול אתילי.
• 1 M פתרון של אשלגן הידרוקסיד (KOH) ב 96% אלכוהול אתילי: נפח 1 של פתרון M 11 KOH מעורבב עם 10 כרכים של אלכוהול 96% אתיל. מגיב מוכן ביום המחקר. אם מכתים מתרחשת במהלך ערבוב, אלכוהול יש לנקות על ידי זיקוק לפני השימוש.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• תערובת קסילן אוקטן: מוכן על ידי ערבוב כמויות שוות של קסילן אוקטן.

החקירות מתבצעות על ספקטרופוטומטר.

מהלך קביעת ויטמין A

דם נלקח מן האצבע (על 1 מ"ל) הוא הציג את התווית צנטריפוגה והניח כוס כוס עם מים חמים (טמפרטורה 40-45 מעלות צלזיוס) במשך 20-30 דקות. כדי להפריד את הסרום, קריש הדם הוא בזהירות סביב קצה הצינור עם מוט זכוכית דקה centrifuged בסל"ד 3000 במשך 10 דקות.

בחר 0.12 מ"ל של נסיוב ולהעביר אותו צינור התלכדות, ולאחר מכן להוסיף 0.12 מ"ל של 1 M אלכוהול אשלגן הידרוקסיד פתרון. התוכן מזועזע בקפידה.

צינורות בדיקה עם בדיקות ממוקמים באמבט מים במשך 20 דקות בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס עבור הידרוליזה.

הדגימות הם מקורר 0.12 מ"ל של תערובת קסילן אוקטן נוסף להם, מזועזע במרץ במשך 10-15 שניות. מגניב שוב צנטריפוגה.

בזהירות להסיר את השכבה העליונה המכיל ויטמין A וקרוטנואידים עם פיפטה פסטר עם גומי יכול ולהעביר אותו microcovettes.

דוגמאות הן spectrophotometric באורך גל של 328 ננומטר - כדי לקבוע ויטמין A, ועל אורך גל של 460 ננומטר - כדי לקבוע קרוטנואידים.

לאחר spectrophotometry המדגם למד נתון לקרינה אולטרה סגולה להרס של ויטמין A. לשם כך, במרחק של 15-20 ס"מ מן קוורץ microcuvettes להגדיר (בקטריות) המנורה כך הקרנה חשוף חלק קובט, מלאות נוזל; את זמן החשיפה של 45-60 דקות.

הדגימות שוב ושוב spectrophotometric באורך גל של 328 ננומטר. התוכן של ויטמין A נקבע מהבדל בערכי הכחדה (צפיפות אופטית), תוך התחשבות במקדם (גורם) 637, שחושב על ידי בסי עבור ויטמין A.

החישוב מתבצע על פי הנוסחה:

X = 637 × (Е328 (1) - Е328 (2)),

שבו X הוא תכולת ויטמין A, μg / dL; 637 הוא מקדם מחושב על ידי Bessey לקביעת ויטמין A; Е328 (1) - צפיפות אופטית של הפתרון לפני הקרנה; E328 (2) הוא צפיפות אופטית של הפתרון לאחר הקרנה.

מקדם העברת הריכוז של ויטמין A מ μg / dL ב μmol / l הוא 0.035.

התוכן של קרוטנואידים מחושב על ידי הנוסחה:

X = 480-Е480,

שבו X הוא התוכן של קרוטנואידים, μg / dL; 480 הוא מקדם מחושב על ידי Bessey כדי לקבוע קרוטנואידים; E480 הוא צפיפות אופטי של פתרון הבדיקה.

הערה:

לדברי בסי, נפח גדול או קטן יותר של כרכים ניתן לקחת במהלך הלימודים, אבל היחס שלה עם נפח של פתרון אלכוהול צריך להיות קבוע עם כל שינוי בהיקף (כמות) של תערובת קסילן אוקטן.

הנורמה בתכולת ויטמין A בסרום הדם היא: בתינוקות ותינוקות - 160-270 מיקרוגרם / ליטר; במבוגרים, 1.05-2.45 μmol / l (300-700 מיקרוגרם / l). התוכן של קרוטנואידים בסרום מבוגר הוא 800-2300 מיקרוגרם / ליטר.