ניתוח פולימורפיזם של אורך מקטע הגבלה

השימוש הנרחב באנדונוקלאזות הגבלה שונות לניתוח DNA כרומוזומלי חשף את השונות העצומה של הגנום האנושי. אפילו שינויים קטנים באזורי הקידוד והבקרה של גנים מבניים יכולים להוביל להפסקת הסינתזה של חלבון מסוים או לאובדן תפקודו בגוף האדם, דבר שבדרך כלל משפיע על הפנוטיפ של המטופל. עם זאת, כ-90% מהגנום האנושי מורכב מרצפים לא מקודדים, שהם משתנים יותר ומכילים מוטציות ניטרליות רבות, או פולימורפיזמים, ואין להם ביטוי פנוטיפי. אזורים פולימורפיים (לוקוסים) כאלה משמשים באבחון מחלות תורשתיות כסמנים גנטיים. לוקוסים פולימורפיים קיימים בכל הכרומוזומים ומקושרים לאזור ספציפי של הגן. על ידי קביעת המיקום של לוקוס פולימורפי, ניתן לקבוע איזה גן קשור למוטציה שגרמה למחלה אצל המטופל.

כדי לבודד אזורי DNA פולימורפיים, משתמשים באנזימים חיידקיים - רסטריקטאזות, שתוצרן הוא אתרי הגבלה. מוטציות ספונטניות המתרחשות באתרים פולימורפיים הופכות אותם לעמידים או, להיפך, רגישים לפעולת רסטריקטאז ספציפי.

ניתן לזהות שונות מוטציונית באתרי הגבלה על ידי שינוי אורך מקטעי ההגבלה של ה-DNA על ידי הפרדתם באמצעות אלקטרופורזה והכלאה לאחר מכן עם גלאי DNA ספציפיים. בהיעדר הגבלה באתר פולימורפי, יזוהה מקטע אחד גדול באלקטרופורגרמות, ובנוכחותו, יהיה נוכח מקטע קטן יותר. נוכחותו או היעדרו של אתר הגבלה בלוקוסים זהים של כרומוזומים הומולוגיים מאפשרת סימון אמין למדי של הגן המוטנטי והגן הרגיל ומעקב אחר העברתו לצאצאים. לפיכך, כאשר חוקרים DNA של חולים בשני הכרומוזומים שבהם קיים אתר הגבלה באזור פולימורפי, יזוהו מקטעי DNA קצרים באלקטרופורגרם. בחולים הומוזיגוטים למוטציה שמשנה את אתר ההגבלה הפולימורפי, יזוהו מקטעים ארוכים יותר, ובחולים הטרוזיגוטים, מקטעים קצרים וארוכים.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]